ⅠNukleīnskābeiievads
Nukleīnskābi iedala dezoksiribonukleīnskābē (DNS) un ribonukleīnskābē (RNS), starp kurām RNS ir sadalīta ribosomu RNS (rRNS), ziņojuma RNS (mRNS) un pārneses RNS (tRNS) atbilstoši tās dažādajām funkcijām.DNS galvenokārt koncentrējas kodolā, mitohondrijās un hloroformā, savukārt RNS galvenokārt izplatās citoplazmā.Nukleīnskābju ekstrakcijai kā gēnu ekspresijas materiālajam pamatam ir ārkārtīgi liela nozīme molekulārās bioloģijas pētījumos un klīniskajā molekulārajā diagnostikā.Nukleīnskābju ekstrakcijas koncentrācija un tīrība tieši ietekmēs turpmāko PCR, sekvencēšanu, vektora konstruēšanu, fermentu gremošanu un citus eksperimentus.
Ⅱ Nukleīnskābju ekstrakcijas un attīrīšanas metode
① Fenola/hloroforma ekstrakcijas metode
Fenola/hloroforma ekstrakcija ir klasiska DNS ekstrakcijas metode, kurā paraugu apstrādei galvenokārt izmanto divus dažādus organiskos šķīdinātājus, ūdens fāzē izšķīdinot nukleīnskābi uz DNS, organiskajā fāzē lipīdus un starp abām fāzēm olbaltumvielas.Šīs metodes priekšrocības ir zemas izmaksas, augsta tīrība un labs efekts.Trūkumi ir sarežģīta darbība un ilgs laiks.
② Trizola metode
Trizola metode ir klasiska RNS ekstrakcijas metode.Trizola metodi pēc centrifugēšanas ar hloroformu sadala ūdens fāzē un organiskajā fāzē, kurā RNS tiek izšķīdināts ūdens fāzē, ūdens fāze tiek pārnesta uz jaunu EP cauruli, pēc izopropanola pievienošanas tiek iegūts nogulsnējums, un pēc tam tiek veikta attīrīšana ar etanolu.Šī metode ir piemērota RNS ekstrakcijai no dzīvnieku audiem, šūnām un baktērijām.
③ Centrbēdzes kolonnas attīrīšanas metode
Centrifūgas kolonnas attīrīšanas metode var īpaši adsorbēt DNS, izmantojot īpašus silīcija matricas adsorbcijas materiālus, savukārt RNS un olbaltumvielas var vienmērīgi iziet cauri, un pēc tam izmantot augstu sāls zemu PH, lai apvienotu nukleīnskābi, zemas sāls augstas PH vērtības eluēšanu, lai atdalītu un attīrītu nukleīnskābi.Priekšrocības ir augsta attīrīšanas koncentrācija, augsta stabilitāte, nav nepieciešams organisks šķīdinātājs un zemas izmaksas.Trūkums ir tāds, ka tas ir jācentrifugē soli pa solim, vairāk darbības soļu.
④ Magnētisko pērlīšu metode
Magnētisko lodīšu metode ir sadalīt šūnu audu paraugu caur lizātu, atbrīvot paraugā esošo nukleīnskābi, un pēc tam nukleīnskābes molekulas tiek īpaši adsorbētas uz magnētiskās lodītes virsmas, bet piemaisījumi, piemēram, olbaltumvielas un cukuri, tiek atstāti tajā. šķidrums.Šūnu audu sadalīšanas, magnētisko lodīšu saistīšanās ar nukleīnskābi, nukleīnskābju mazgāšanas, nukleīnskābju eluēšanas utt. soļiem beidzot tiek iegūta tīra nukleīnskābe.Priekšrocības ir vienkārša darbība un īss lietošanas laiks, bez nepieciešamības veikt pakāpenisku centrifugēšanu.Tam ir zemas tehniskās prasības, un tas var realizēt automātisku un masveida darbību.Īpašā magnētiskās lodītes un nukleīnskābes kombinācija padara ekstrahēto nukleīnskābi ar augstu koncentrāciju un tīrību.Trūkums ir tas, ka pašreizējā tirgus cena ir salīdzinoši dārga.
⑤ Citas metodes
Papildus iepriekšminētajām četrām metodēm ir vārīšanās krekinga metode, koncentrēta sāls metode, anjonu mazgāšanas līdzekļa metode, ultraskaņas metode un fermentatīvā metode utt.
Ⅲ Nukleīnskābju ekstrakcijas veids
Foregene ir pasaulē vadošā tiešā PCR platforma, divu kolonnu RNS izolācijas platforma (tikai DNS + tikai RNS).Galvenie produkti ietver DNS/RNS izolācijas komplektus, PCR un tiešo PCR reaģentu molekulāro laboratoriju reaģentu sēriju.
① Kopējā RNS ekstrakcija
Kopējos RNS ekstrakcijas paraugos ietilpst asinis, šūnas, dzīvnieku audi, augi, vīrusi utt. Augstu tīrību un augstu kopējās RNS koncentrāciju var iegūt ar kopējo RNS ekstrakciju, ko var izmantot RT-PCR, mikroshēmu analīzē, in vitro translācijā, molekulārā klonēšana, Dot Blot un citi eksperimenti.
Saistīts ar foregēnuRNS izolācijas komplekti
Dzīvnieku kopējās RNS izolācijas komplekts--Ātri un efektīvi ekstrahē augstas tīrības un augstas kvalitātes kopējo RNS no dažādiem dzīvnieku audiem.
Šūnu kopējās RNS izolācijas komplekts--Augsti attīrītu un kvalitatīvu kopējo RNS var iegūt no dažādām kultivētām šūnām 11 minūtēs.
Augu kopējās RNS izolācijas komplekts--Ātri ekstrahējiet augstas kvalitātes kopējo RNS no augu paraugiem ar zemu polisaharīdu un polifenolu saturu.
Vīrusu RNS izolācijas komplekts- Ātri izolējiet un attīriet vīrusu RNS no tādiem paraugiem kā plazma, serums, ķermeņa šķidrumi bez šūnām un šūnu kultūras supernatanti.
② Genoma DNS ekstrakcija
Genoma DNS ekstrakcijas paraugi ietver augsni, izkārnījumus, asinis, šūnas, dzīvnieku audus, augus, vīrusus utt. Genoma DNS ekstrakciju var izmantot fermentu gremošanā, DNS bibliotēkas veidošanā, PCR, antivielu sagatavošanā, Western blot hibridizācijas analīzē, gēnu mikroshēmā, augstu -caurlaidspējas sekvencēšana un citi eksperimenti.
Saistīts ar foregēnuDNS izolācijas komplekti
Dzīvnieku audu DNS izolācijas komplekts- Ātra genoma DNS ekstrakcija un attīrīšana no vairākiem avotiem, piemēram, dzīvnieku audiem, šūnām utt.
Asins DNS Midi komplekts (1-5 ml)-- Ātri attīriet augstas kvalitātes genoma DNS no antikoagulētām asinīm (1-5 ml).
Vaigu uztriepes/FTA kartes DNS izolācijas komplekts-- Ātri attīriet augstas kvalitātes genoma DNS no vaigu uztriepes/FTA kartes paraugiem.
Augu DNS izolācijas komplekts-- Ātri attīriet un iegūstiet augstas kvalitātes genoma DNS no augu paraugiem (ieskaitot polisaharīdus un polifenolu augu paraugus)
③ Plazmīdu ekstrakcija
Plazmīda ir sava veida apļveida mazas molekulas DNS šūnās, kas ir kopīgs DNS rekombinācijas nesējs.Plazmīdu ekstrakcijas metode ir RNS noņemšana, plazmīda atdalīšana no baktēriju genoma DNS un olbaltumvielu un citu piemaisījumu noņemšana, lai iegūtu salīdzinoši tīru plazmīdu.
General Plasmid Mini Kit- Ātri attīriet augstas kvalitātes plazmīdu DNS no transformētām baktērijām, lai veiktu rutīnas molekulārās bioloģijas eksperimentus, piemēram, transformāciju un fermentu gremošanu
④ Citi ekstrakcijas veidi, miRNS ekstrakcija utt.
Dzīvnieku miRNS izolācijas komplekts- Ātri un efektīvi ekstrahējiet mazus 20-200 nt miRNS, siRNS, snRNS RNS fragmentus no dažādiem dzīvnieku audiem un šūnām
Ⅳ Prasības nukleīnskābju ekstrakcijas un attīrīšanas rezultātams
① Nodrošināt nukleīnskābes primārās struktūras integritāti.
② Samaziniet proteīnu, cukuru, lipīdu un citu makromolekulu traucējumus
③ Nukleīnskābju paraugos nedrīkst būt organisko šķīdinātāju vai augstas koncentrācijas metālu jonu, kas var inhibēt fermentu.
④ RNS un citu nukleīnskābju piesārņojums ir jānovērš, ekstrahējot DNS, un otrādi.
Izlikšanas laiks: 2022. gada 24. novembris
